产品列表PRODUCTS LIST

首页 > 技术与支持 > 如何解决色谱柱使用过程中出现的问题
如何解决色谱柱使用过程中出现的问题
点击次数:3927 更新时间:2007-01-31
 

一、保留值与分离度重现性不好原因分析

问题

原因

表现

不同色谱柱间差异使用期间柱变化

填料、键合相不同

柱床破坏

键合相丢失

硅胶基质溶解

强保留组分堆积堵塞

保留因子(k), 分离因子(a

柱效(N

保留因子(k), 分离因子(a

柱效(N)

保留因子(k), 柱效(N)

柱外效应

系统差异、进样量大、进样阀与色谱柱之间、色谱柱与检测器之间的管路太长、检测器流通池体积大、接头死体积大等。

柱效(N)

分离效果变差

流动相组分改变

流速改变

温度改变

保留因子(k),柱效变化很小

保留因子(k), 分离因子(a)

保留因子(k), 柱效变化很小

柱平衡慢

重新平衡时间不够

保留因子(k), 柱效变化很小

柱超载

样品量太大

保留因子(k), 柱效(N)

二、造成色谱峰( 不对称)拖尾的原因

1.色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷;

2.柱头有污染;

3.样品超载;

4.样品溶剂不合适;

5.柱外效应;

6.化学或二次保留(硅羟基)效应;

7 缓冲容量不足或不合适;

8 重金属污染。

三、如何解决峰形拖尾的问题

A. 与化学有关的拖尾问题

1.流动相中,加入30mM的三乙胺(用于碱性化合物)或醋酸胺(用于酸性化合物), 未知化合物加醋酸三乙胺;

2.如仍然拖尾,将三乙胺换为二甲基辛胺(或醋酸二甲基辛胺);

3.降低进样量至<1μg

B. 与色谱柱有关的拖尾问题

1.如柱头处有强保留的样品组分积聚,反相柱可用20倍柱体积的96%的二氯甲烷与4%甲醇,加1%氢氧化铵混合液冲洗;正向柱可用甲醇冲洗;

2.使用保护柱。

C. HPLC系统有关的峰拖尾和峰加宽

1.进样体积过大,(通常≤25μL);

2.进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大(*连接管应<20cm,内径为0.007");

3.检测器流通池的体积过大。

四、如何贮存色谱柱

1.防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物,做到流动相用多少配多少, 或在水流动相中加200ppm的叠氮钠以抑制细菌生长(一定当心其毒性和潜在的爆炸性);或在流动相中加20%的有机改性剂,也可抑制微生物生长, 有机改性剂还有助于流动相脱气。

2.尽可能将色谱柱贮存于100%有机溶剂(乙晴)中,避免在缓冲溶液中保存。

3.使用缓冲溶液后的色谱柱,应用1520倍柱体积的不含缓冲剂的同种水-有机溶剂流动相冲洗色谱柱,后换成100%有机溶剂贮存。

4.避免用纯水冲洗键合致密的C18柱。

5.将色谱柱的两端用堵头拧好,以免柱床填料干裂。